[轉(zhuǎn)帖]瘢痕動(dòng)物模型的研究進(jìn)展

瘢痕動(dòng)物模型的研究進(jìn)展 組織創(chuàng)傷修復(fù)包括再生和瘢痕愈合兩種形式，其中再生一般只發(fā)生在低等生物和胚胎早期的創(chuàng)傷，成人組織創(chuàng)傷修復(fù)一般通過瘢痕愈合。 瘢痕又包括不高出于正常皮膚的非病理性瘢痕（又稱正常瘢痕，Normal Scar）和高出正常皮膚的病理性瘢痕（又稱異常瘢痕，Abnormal Scar）其中多數(shù)傷口愈合后表現(xiàn)為病理性瘢痕，后者又包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩。不論何種類型的瘢痕增生都可能影響外貌與功能，是整形外科臨床上最常見的疾病。 研究瘢痕增生機(jī)制，探索有效的防治方法對(duì)于減輕或消除瘢痕造成的各種畸形具有十分重要的意義。瘢痕研究一般包括細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物模型和臨床觀察三種方式。其中瘢痕動(dòng)物模型的復(fù)制非常困難，一直是該研究領(lǐng)域的學(xué)者們努力的一個(gè)方向，近年來，在該領(lǐng)域有一些新的進(jìn)展，本文在復(fù)習(xí)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上予以綜述如下。 1.裸鼠瘢痕移植模型 以往大量的研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物傷口愈合后一般形成非增生性的正常瘢痕，而罕見瘢痕增生的現(xiàn)象，在動(dòng)物皮膚上復(fù)制病理性瘢痕的努力一直難以有大的突破，因此，有學(xué)者受動(dòng)物荷瘤模型的啟發(fā)，將人類的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩移植到?jīng)]有免疫力的裸鼠身上，進(jìn)行關(guān)于瘢痕的發(fā)生機(jī)制及防治方法的研究。 1985年，Shetlar等首次將未經(jīng)處理的人瘢痕疙瘩組織切成5－10mm長的小塊，移植到裸鼠背部皮下，術(shù)后1周到2個(gè)月內(nèi)不同時(shí)間取出植入組織檢查，光鏡檢查提示：所有植入瘢痕均保持原有的活性和組織學(xué)特性， 沒有細(xì)胞變性和炎性浸潤，無一排斥或死亡，此舉在沒有合適的瘢痕動(dòng)物模型條件下，為瘢痕的研究開辟了一條新的途徑。Esrem將瘢痕疙瘩切成1µm厚的薄片,并培養(yǎng)來源于人瘢痕疙瘩組織的成纖維細(xì)胞,然后分別移植到裸鼠皮下,發(fā)現(xiàn)大約2周后都生成皮下硬塊,鏡下可見該硬塊有特征性的較寬的折射性嗜伊紅膠原帶,類似人體瘢痕,而植入的成纖維細(xì)胞可保持原有性狀,細(xì)胞能繼續(xù)增殖!并有膠原沉積,呈現(xiàn)異常瘢痕的結(jié)構(gòu) 由于移植的瘢痕塊較小,使其研究受到局限。為此Kischer等人將移植的人增生性瘢痕和瘢痕疙瘩組織塊增大到5mm*5mm*8mm移植到裸鼠的皮下,留置時(shí)間延長到246天仍未發(fā)生排斥,所有植入體均保持原有組織學(xué)特性且不隨時(shí)間延長而改變,每一個(gè)體均保持其原有的典型結(jié)節(jié),通過掃描電鏡植入瘢痕血管閉塞的數(shù)量和程度同原來的瘢痕相比無明顯差異, 后來他又注入鋇劑來顯示宿主與植入體間微循環(huán)的聯(lián)系,并通過DNA-Hoechst染色的方法檢測(cè)鑒定人和鼠細(xì)胞成分,發(fā)現(xiàn)移植后8天,鼠的微血管伸向移植體周圍,16 天后兩者之間有血管的吻接,但還未發(fā)現(xiàn)有明顯的血管進(jìn)入或穿過植入的瘢痕組織. 為了盡量模擬人類皮膚受損后生長的瘢痕特點(diǎn),Robb將人的正常皮膚組織移植到裸鼠身上,1個(gè)月后給予深2度燒傷,連續(xù)觀察3－6 個(gè)月后，發(fā)現(xiàn)移植的正常皮膚的存活及燒傷創(chuàng)面的愈合過程，在大體和電鏡下與人體相比沒有明顯不同，而移植的黑人皮膚燒傷愈合后瘢痕形成比移植的白人皮膚更為顯著，這一點(diǎn)與增生性瘢痕的流行病學(xué)特征相一致。他還將正常皮膚制成網(wǎng)狀皮膚進(jìn)行移植，結(jié)果收縮非常明顯，而這與臨床特點(diǎn)也相吻合。 制造模型的目的就是要尋求治療瘢痕的方法，為此Waki等首次利用人瘢痕疙瘩和增生性瘢痕植入裸鼠模型，通過病灶內(nèi)注射，腹腔內(nèi)注射或口服等不同的方法給藥，比較青素胺、乙酰半胱胺酸、秋水仙堿以及皮質(zhì)類固醇對(duì)瘢痕的影響，發(fā)現(xiàn)前兩者可促進(jìn)其降解，皮質(zhì)類固醇可阻止其生長，而秋水仙堿卻無明顯作用。Wolfort等將免疫結(jié)合的光敏劑連接的單克隆抗體與人的肌成纖維細(xì)胞（PR2D3） 結(jié)合。將人體增生性瘢痕組織塊植入裸鼠，經(jīng)過15天，植入塊可增大至20 倍。在植入后第4 天， 將上述免疫結(jié)合劑注入移植體內(nèi)，再過24h 開始用激光（630nm,120J/cm²對(duì)移植體照射，與對(duì)照組比較，可以明顯地抑制植入人瘢痕組織的生長（p<0.05）鏡下可見實(shí)驗(yàn)組有大量脂質(zhì)小體，表明有大量細(xì)胞損害。Shetlar等對(duì)接受人瘢痕組織移植的裸鼠用PFD喂食，每克食物中含2.75mg。此量對(duì)鼠無害，但植入組織量明顯低于對(duì)照組， 說明PFD 可使瘢痕疙瘩組織降解、吸收。 為延長移植的瘢痕組織存活時(shí)間，1998 年，Polo 等將人的86塊增生性瘢痕組織植入帶有血管蒂的裸鼠皮瓣中。12 個(gè)月后，瘢痕組織的成纖維細(xì)胞及上皮組織均保持原有性狀，瘢痕組織內(nèi)有高水平的人3型前膠原的表達(dá)，其微血管發(fā)現(xiàn)有兩層基底膜，但其內(nèi)層未查出人的第8因子，提示有鼠的血管長入，與原有的增生性瘢痕相比，植入的增生性瘢痕的成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)較弱的增殖能力. 我國對(duì)于瘢痕模型的研究起步較晚， 且大都是重復(fù)實(shí)驗(yàn)。1994年，我國第三軍醫(yī)大學(xué)的劉宏亮進(jìn)行了增生性瘢痕移植至裸鼠的病理學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)90％的移植瘢痕有活性，移植瘢痕成活在50－120 天不等，光鏡、電鏡觀察和膠原含量的測(cè)定均符合人類自身增生性瘢痕的特點(diǎn)，其后，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)的辛?xí)r林，中山醫(yī)科大學(xué)的祁少海等也做了相關(guān)的研究后認(rèn)為，建立增生性瘢痕裸鼠模型是可行的，移植的增生性瘢痕在六七周內(nèi)能保持原有的結(jié)構(gòu)特征，適用于各種治療研究。 裸鼠模型的建立，雖然為一些瘢痕防治藥物的對(duì)比研究提供了一種方法，但畢竟不是動(dòng)物自身產(chǎn)生的瘢痕，且裸鼠缺乏胸腺和淋巴細(xì)胞，因此無法研究增生性瘢痕與瘢痕疙瘩的產(chǎn)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的內(nèi)在規(guī)律，同時(shí)，植的瘢痕組織在出現(xiàn)有限度的生長之后，很快轉(zhuǎn)入萎縮過程，最終均吸收消失，這與瘢痕在人體的增生，特別是瘢痕疙瘩的持續(xù)增生有很大的不同，因此，這一模型有很大的局限性，難以在瘢痕研究中得到廣泛應(yīng)用。 2. 動(dòng)物增生性瘢痕模型 由于絕大多數(shù)動(dòng)物傷口愈合的結(jié)果與人類有很大的不同，動(dòng)物皮膚創(chuàng)傷后出現(xiàn)瘢痕增生的現(xiàn)象極其罕見。 因此，有很多學(xué)者在很早以前就得出了動(dòng)物不長病理性瘢痕的結(jié)論，但是，仍然有學(xué)者報(bào)道用馬或別的動(dòng)物制作的動(dòng)物模型，還有少數(shù)學(xué)者在該領(lǐng)域進(jìn)行不斷的探索，并取得了一些結(jié)果，特別是近年來在兔耳腹側(cè)復(fù)制的模型，與人體增生性瘢痕有許多相似之處，有望成為瘢痕研究的動(dòng)物模型使用。 Moriss報(bào)道1995年曾有人通過對(duì)兔皮膚注射卡介苗二氏桿菌以引起瘢痕疙瘩， 由于其他人不能重復(fù)其試驗(yàn)，未予以認(rèn)可。Davidson于1996年曾描述動(dòng)物氣管損傷后可出現(xiàn)類似增生性瘢痕樣的改變，但其與皮膚的增生性瘢痕有無相似之處尚不清楚。還有一些關(guān)于在馬、豬等動(dòng)物身上出現(xiàn)增生性瘢痕的報(bào)道。 1997年Moriss 等人在研究兔耳腹側(cè)創(chuàng)面愈合的過程中發(fā)現(xiàn)，傷口愈合后局部出現(xiàn)類似于人增生性瘢痕的組織增生現(xiàn)象，他們將曲安舒松注射到其中，發(fā)現(xiàn)組織增生塊明顯縮小，提出兔耳腹側(cè)傷口愈合后形成的組織增生塊有可能作為增生性瘢痕研究的動(dòng)物模型。1998 年，第四軍醫(yī)大學(xué)李薈元等受Moriss等人研究工作的啟發(fā)在國內(nèi)首先復(fù)制了兔耳腹側(cè)創(chuàng)傷愈合后的組織增生模型。他們?cè)谕枚箓?cè)面造成直徑為6mm的圓形1.5cm*1.5cm的正方形和1.5cm*4.5cm的長方形全層皮膚缺損，發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面愈合后可出現(xiàn)真皮過度增生，發(fā)生率在70％以上，同時(shí)他們還分析了兔耳增生塊早，晚期的1，3型膠原含量的比例，顯示與人增生性瘢痕相似，并通過原位雜交技術(shù)對(duì)兔耳增生組織的1，3型前膠原mRNA的表達(dá)進(jìn)行了動(dòng)態(tài)觀察，結(jié)果顯示為高表達(dá)，與人增生性瘢痕相似、 同時(shí)局部注射TGF－β能刺激I型前膠原mRNA的表達(dá)，這與人的增生性瘢痕組織的反應(yīng)相同。2002年Saulis等利用兔耳模型進(jìn)行了瘢痕治療方面的研究，類固醇注射、放射治療和硅酮貼敷是目前臨床上治療瘢痕最常用的非手術(shù)治療方法，他對(duì)Mederma采用上述方法在兔耳模型上進(jìn)行了對(duì)比觀察,研究發(fā)現(xiàn)Mederma有利于逆轉(zhuǎn)瘢痕組織中的炎癥和增生反應(yīng)。2003年Kim在每只兔耳腹面上制作了四個(gè)7mm 深的潰瘍創(chuàng)面，在右耳創(chuàng)面上每天應(yīng)用1％的4－脯氨酰羥化酶抑制因子一次，連續(xù)用7天，左耳作對(duì)照28天后與對(duì)照組相比瘢痕高度降低了26％。 除了兔的瘢痕模型外Silverstein于1972年和1976年報(bào)道了在12只紅色的雌性杜洛克豬的供皮區(qū)出現(xiàn)了類似于人類的增生性瘢痕。Kathy于2003年5月在Science上發(fā)表了一篇利用紅色的雌性杜洛克豬制作的瘢痕動(dòng)物模型,他用取皮鼓分別以0.015，0.030，0.045，0.060，0.075，0.090，0.105及0.120cm的厚度切取8cm*8cm的豬皮,他認(rèn)為在0.060－0.070之間最接近人類受傷的情況，他還認(rèn)為豬的皮膚存在Cone, Cone簡單地說就是一種結(jié)構(gòu)，它貫穿于表皮與真皮，在表皮的表面有很小的孔徑，含有物質(zhì) 大都是毛干組織，在底部，它的直徑在2－3nm，里面的物質(zhì)大多為皮下的脂肪顆粒。在這兩層之間, Cone有不同的直徑，含有毛囊的附屬器、血管和神經(jīng)等。Kathy 則認(rèn)為這可能是豬能形成增生性瘢痕的主要原因。 2002年，Aksoy在豚鼠上做了瘢痕模型的實(shí)驗(yàn)研究，他將豚鼠分為三組：第一組，去除豚鼠的肉膜層后用手術(shù)刀片致傷；第二組，去除豚鼠的肉膜層后用75nm的鋁片燙傷豚鼠皮膚；第三組，去除肉膜后形成創(chuàng)傷并在創(chuàng)面上涂抹煤焦油。 第三組出現(xiàn)了較明顯的瘢痕樣組織，通過光鏡、電鏡觀察和測(cè)量葡糖－6－磷酸脫氫酶活性對(duì)比研究后，認(rèn)為其與人類增生性瘢痕具有相似性。 雖然以往有許多學(xué)者進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究，但迄今為止除兔耳腹側(cè)形成的組織增生塊與人增生性瘢痕有一定的相似之處，并且可以得到重復(fù)外，其他文獻(xiàn)報(bào)道的模型均或存在一定的缺陷或難以重復(fù)而很難得到廣泛認(rèn)可。 關(guān)于在動(dòng)物體表難以復(fù)制出瘢痕模型可能有以下原因：1.皮膚結(jié)構(gòu)不同：動(dòng)物的皮膚較厚且大都較松弛，都有肉膜存在。受傷后皮膚收縮很快，如家兔下肢3.5cm*5.0cm的創(chuàng)面，2周后便會(huì)收縮封閉傷口，4周后創(chuàng)面已經(jīng)完全愈合。而人類的皮膚則較薄、較緊，皮下無肉膜，傷口收縮有限；2.毛發(fā)多少的不同： 大多數(shù)動(dòng)物的體表都覆蓋著厚厚的毛發(fā)，但人的體毛比動(dòng)物少很多。這兩種原因是否為人與動(dòng)物出現(xiàn)瘢痕增生差異的真正原因，還不得而知。 倪云志 郭樹忠 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院整形外科

疤痕累累

有時(shí)間在來看，繼續(xù)研究和探索

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555現(xiàn)在才研究到動(dòng)物身上，到人都不知道什么時(shí)候拉555#14